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多聚甲醛 批发零售

返回列表 来源:河南派胜祥化工有限公司 日期:2019-11-23 09:01:34

多聚甲醛固定,确实是老生长谈,很多研讨生在做实验时,可能很多师兄师姐都让他们用多聚甲醛固定,有些可能是为了长时间保管样本,希望集中起来染色,有些可能是染色后排不上队,想坚持长时间质量稳定。于是就这么口口相传下来了。

预固定问题

做科研或临床时,可能很多FLOWER习气性都会用4%多聚甲醛预先固定标本,可能出于三个目的: (1)为了灭活标本里面可能存在的微生物(细菌、病毒等),起到安全保证作用。 (2)希望标本能够较长时间存放 (3)做胞内染色前的准备。 但是,可能很多人忽视了一点,就是假设在染色之前用多聚甲醛固定标本,细胞表面有些位点在固定后构象发作改动,使得抗体无法别离产生假阴性,也可能由于固定作用,招致其它位点产生非特异性别离(假阳性)。

因此,知道哪些抗体染色前不能预固定贴心的技术人员曾经帮我们做了一系列测试,下面两张表,一张是人类抗原,一张是小鼠抗原,可以看的出来,大多数不能做预固定的抗体都是趋化因子受体,所以,大家在实验中千万要留意不要先固定后染色。

表1、4%多聚甲醛预固定对各种抗体表面染色的影响(人类),打勾的为允许预固定,打叉的表示预固定影响很大
表2、4%多聚甲醛预固定对各种抗体表面染色的影响(小鼠),打勾的为允许预固定,打叉的表示预固定影响很大

染色后固定问题

染色后的固定,就与抗原构象关系不大了,更多的是荧光素。以前4色以内的时分,用的荧光素都是非串联的,因此大多数影响不大,但随着各种新型串联染料的呈现,多聚甲醛固定就成了问题了。

事实上,当你去搜索串联染色标志(如PE-cy7、APC-cy7等)的抗体时,会发现一些比较细致的描画里面会注明(以BD网站搜索APC-cy7各类抗体为例):

Fixed cells should be analyzed within 4 hours of fixation in paraformaldehyde or transferred to a paraformaldehyde-free buffer for overnight storage.

意义就是用多聚甲醛固定过的样本,必需在4小时内检测,否则容易招致串联染料降解,若要长时间保管,还是需求洗濯后,转移到不含多聚甲醛的缓冲液中。

需求留意的是,做GFP荧光检测的同窗,也需求留意一下,多聚甲醛固定也会影响GFP,New York Medical College的Paul A Lucas以为是由于多聚甲醛固定后,并非使GFP荧光淬灭,而是使GFP蛋白构象发作改动,无法产生荧光。有时分你固定后检测到的荧光可能是自发荧光,或剩余的未被改动构象的GFP发出的。

处方案

1、假设检测的是前述表格中容易被多聚甲醛影响的分子,请尽量不要预固定,如需长期保管样本,可以思索冻存单个核细胞。

2、假设检测的是前述表格中不会受多聚甲醛影响的分子,可用1%多聚甲醛预固定保管,但FSC、SSC和荧光强度影响较大,如需避免此类缺陷,可思索流式中文网研发的细胞保管液。流式中文网的细胞保管液不含多聚甲醛,具有缓释轻柔的固定作用,故保管更耐久,效果更佳,样本:保管液=6:1~10:1,21~28天内检测均可获得良好的检测结果。

3、假设希望在染色后坚持较长时间荧光稳定,仍首选建议:避光、4度,在我们非正式的10色(BV405、KO、FITC、PE、ECD、PE-cy5.5、PE-cy7、APC、APC-A700、APC-cy7)流式检测时,曾经测过数例,在避光、4度保管24小时后,荧光强度几乎无变化,细胞分群良好。  假设仍不放心,可思索置办商品化的适用于串联染料的专用固定剂。
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